2012-10-06
[3449]
液相色譜柱的制備制備了兩種尺寸的10b錐型制備液相色譜柱：柱1[50mm@（18→9）mm.id.]和柱2[100mm@（36→18）mm.id.].可視化裝置的柱管材料為有機(jī)玻璃，由于有機(jī)玻璃易被溶劑腐蝕，所以將加工尺寸相同的不銹鋼色譜柱用于考察柱效。在考察流型時(shí)，為觀測到清晰的樣品譜帶，柱1的進(jìn)樣量為80LL，柱2的進(jìn)樣量為600LL.在分離樣品時(shí)，進(jìn)樣量分別為40和160LL.
流型的研究由于整個可視化裝置為一體結(jié)構(gòu)，因此可以準(zhǔn)確地確定內(nèi)部錐型液相色譜柱入口和出口的位置。將紙質(zhì)標(biāo)尺垂直粘貼在其中一個垂直平面上，其0刻度位置與錐型液相色譜柱入口處的位置相同，利用該標(biāo)尺就可以準(zhǔn)確地測量樣品譜帶沿柱長方向移動的距離。
譜帶在柱內(nèi)的動態(tài)過程用肉眼可以清楚地看到譜帶流型的立體圖像。但由于受數(shù)碼相機(jī)記錄系統(tǒng)的限制，只能給出二維照片。為可視化裝置得到的譜帶流型的動態(tài)照片?？梢钥闯觯瑯悠吩阱F型柱內(nèi)的洗脫過程中能保持平頭塞子狀流型。在（A）中，使用無定形硅膠填料，樣品在柱內(nèi)有明顯的拖尾，使譜帶展寬，降低了分離柱效。（B）使用球形硅膠填料，樣品沒有拖尾。對無定形填料的孔徑分布的測量結(jié)果表明，它含有大量3nm左右的孔分布，由于對小分子樣品有強(qiáng)烈的滯留作用而引起拖尾，而球形硅膠單體中這種孔分布則很少。
從直觀的譜帶流型照片可見，（B）比（A）有更高的柱效。（A）的峰形有嚴(yán)重拖尾，而（B）的峰形對稱性很好，這一結(jié)果用可視化裝置直觀拍攝到的譜帶流型動態(tài)照片一致，表明可視化裝置可真實(shí)地反映樣品譜帶在柱內(nèi)的動態(tài)過程。
流速對譜帶流型的影響流動相的流速可能會影響譜帶流型，即影響錐型柱獲得的平頭塞子狀流型。實(shí)驗(yàn)采用數(shù)碼相機(jī)和自制標(biāo)尺考察了流速對流型的影響，結(jié)果如所示。結(jié)果表明，對于柱長5cm，錐角10b的錐型柱，流速的變化對譜帶流型幾乎無影響，即流速在18mL/min范圍內(nèi)，譜帶能保持塞子狀的zui大長度（Lmax）是恒定的。比較曲線a和b可見，球形硅膠填料能保持譜帶為塞子狀的zui大長度比使用無定形填料的長度要長，表明球形填料比無定形填料效果好。
填料粒徑對流型的影響為考察填料的粒徑對10b錐型柱中塞子狀流型的影響，觀察了樣品在20Lm球形硅膠填料上的分離過程。為譜帶流型的動態(tài)照片（流速2mL/min），可見在整個色譜過程中均能保持平頭塞子狀，說明填料的粒徑對錐型柱中的平頭塞子狀流型基本無影響。但是，在進(jìn)樣量和流速相同的情況下，小粒徑填料的色譜柱中的譜帶寬度較小。為填料粒徑不同時(shí)所對應(yīng)的紫外檢測譜圖，（A）的半峰寬為0126min，而（B）的半峰寬為0119min.這與直觀拍攝到的譜帶流型動態(tài)照片一致，說明利用可視化裝置可以提供一種直觀有效的評價(jià)制備液相色譜柱柱效的方法。
柱尺寸對流型的影響為考察柱尺寸對流型的影響，將上述獲得很好塞子狀流型的錐型柱（錐角保持不變）等比例放大，得到柱長為10cm的錐形柱。由可見，在已放大的錐型柱內(nèi)，樣品在整個分離過程中仍保持平頭塞子狀，而且流速的改變同樣不會影響譜帶的流型。從譜帶流型照片可以看出，在柱的入口處樣品分配均勻，說明柱頭及分配盤的設(shè)計(jì)合理。
結(jié)果表明，將10b錐型液相色譜柱等比例放大后，總柱效等比例增加，而且由于柱外效應(yīng)的影響減小，柱效還有所提高。
為比較柱尺寸變化對分離度的影響，使用相同的色譜填料和流動相（流動相3），分別在柱1和柱2上對胭脂紅和亮藍(lán)進(jìn)行了分離。為獲得的紫外檢測譜圖，可見，兩個樣品在柱1上的分離度Rs1為1152，在柱2上的分離度Rs2為2121，Rs2/Rs1=1145，比2（11414）略高。表明10b錐型柱的尺寸按比例放大后柱效略有提高。
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